در Devil May Cry 5 شاهد سه شخصیت اصلی هستیم که بر همین اساس باید انتظار سه خط داستان مختلف را نیز داشت. دانته که کاراکتری نصف انسان و نصف شیطان است، با قابلیت‌های بروز شده آماده برای مبارزه با نیروهای شیطانی، همانند قبل است. در کنار او نیکو نیز وجود دارد که برای نابودی دشمنان دانته را همراهی می‌کند و اما شخصیت جدیدی به نام V به مجموعه اضافه شده که به نظر برای کشتن شیطان منحصربه‌فردی با دانته همکاری خواهد داشت. اما مکانیسم بازی، شما را مجبور خواهد کرد تا برای هر مأموریت فقط از یک شخصیت استفاده کنید و نمی‌توانید از قدرت دو کاراکتر به‌صورت هم‌زمان بهره‌مند شوید. نرو که در بازی Devil May Cry 4، بازوی شیطانی خود را از دست داد، اکنون از مجموع بازوهای رباتیکی بهره می‌برد که توانایی‌های متنوع و بسیاری را ارائه می‌کنند. شخصیت جدید V، از یک کتاب و عصای نقره‌ای بهره می‌برد و از سه شیطان برای مبارزه استفاده می‌کند که از جمله آن‌ها می‌توان به Griffon، عقابی که از حملات مبتنی بر رعدوبرق استفاده می‌کند، اشاره کرد.